Исследования на вирусные гепатиты методом ифа

ВАЖНО! Для того, что бы сохранить статью в закладки, нажмите: CTRL + D

Задать вопрос ВРАЧУ, и получить БЕСПЛАТНЫЙ ОТВЕТ, Вы можете заполнив на НАШЕМ САЙТЕ специальную форму, по этой ссылке >>>

Исследования на вирусные гепатиты методом ифа

ИФА в диагностике вирусных гепатитов. Возможности иммуноферментного анализа

Специфическая лабораторная диагностика вирусных гепатитов основывается на применении иммунохимических и молекулярно-биологических методов исследований. Основными иммунохимическими методами являются радиоизотопный или радиоиммунный (РИА) и иммуноферментный (ИФА). В основе иммунохимических методов диагностики лежит специфическое взаимодействие антиген — антитело с последующим выявлением комплекса при помощи специальных меток. Наиболее распространенным является иммуноферментный анализ.

Первые сообщения о применении иммуноферментного анализа, как метода для определения каких-либо веществ были опубликованы в 1971 году одновременно двумя исследовательскими группами — В. Van Weemen, A. Schuurs и Е. Engvall, P. Perlmann. В основе иммуноферментного анализа лежит следующий принцип: на твердой фазе, в качестве которой используется, главным образом, поверхность лунок полистиролового планшета, фиксируется антиген возбудителя инфекции или антитела (часто смесь антител) к антигенам, которые необходимо обнаружить. Этот антиген или антитела, которые зафиксированы на твердой фазе, называются иммуносорбентом.

В результате инкубации иммуносорбента и испытуемой сыворотки при наличии определяемого агента происходит их связывание в комплекс антиген — антитело. После процедуры промывки, в ходе которой удаляются несвязанные антигены и антитела, проводится инкубация с конъюгатом. В качестве конъюгата при детекции HBsAg используют анти-HBs, при детекции антител к вирусу гепатита С —антитела к иммуноглобулинам человека (антивидовой конъюгат), меченные пероксидазой хрена. В итоге этой инкубации происходит присоединение к уже имеющимся комплексам антиген — антитело дополнительно внесенного конъюгата. После удаления несвязавшегося конъюгата (отмывки) в лунки вносится субстрат. При использовании пероксидазного конъюгата в качестве субстрата используют перекись водорода в сочетании с индикатором, в качестве которого наиболее часто применяют ортофенилендиамин (ОФД) или тетраметилбензидин (ТМБ). Результат оценивается фотометрически.

Качество и надежность аналитических возможностей иммуноферментного метода характеризуются рядом критериев, к числу которых относятся чувствительность, специфичность, правильность и воспроизводимость.

Чувствительность — то минимальное количество вещества, которое может быть обнаружено при помощи иммуноферментного анализа. При этом нижним пределом чувствительности данного метода является концентрация исследуемого вещества в образце, которая соответствует наименьшему положительному результату определения, статистически достоверно отличающемуся от показателей заведомо отрицательных образцов. Чувствительность ИФТС зависит от ряда обстоятельств, связанных как с конструкцией тест-системы (аффинность иммуносорбента, качества экстракционных и буферных систем), так и разрешающей способностью и точностью метода регистрации.

Специфичность — способность выявлять именно те компоненты, для определения которых предназначена данная иммуноферментная тест-система. Специфичность ИФА определяется во многом перекрестной реакцией антител или антигенов (то есть композиции, используемой в качестве иммуносорбента), с близкородственными соединениями, а также составом инкубационной среды (матрикс-эффект).

Правильность — соответствие среднего значения результатов повторных определений одного и того же контрольного образца с истинной величиной измеряемого параметра. Правильность определения в ИФА зависит от качества самой тест-системы и контрольного образца. Для хороших иммуноферментных тест-систем показатели правильности лежат в пределах 90-110 %. Особенностью медико-биологических исследований в ИФА является невозможность установления точной величины, и поэтому за истинную величину принимается средняя от нескольких экспертных лабораторий. Статистическим критерием правильности служит средняя арифметическая и степень ее отклонения от истинного значения, выраженная в процентах.

Воспроизводимость — способность тест-системы показывать одни и те же значения при повторных исследованиях одного и того же образца. Воспроизводимость зависит как от случайных погрешностей (ошибок) при проведении процедуры постановки реакции, так и от качества тест-систем и точности метода регистрации результатов. Считается, что воспроизводимость одних и тех же контрольных образцов одной фирмы в разных лабораториях не должна превышать величину коэффициента вариации в 15%.

ЧИТАЙТЕ ТАКЖЕ:  Определение антител к hbsag вируса гепатита b

Существует несколько специфических схем ИФА для определения маркеров вирусных гепатитов: а) прямой иммуноферментный анализ; б) непрямой иммуноферментный анализ; в) конкурентное ингибирование; в) «ловушеч-ный», или «capture» метод.

Из молекулярно-биологических методов диагностики вирусных гепатитов чаще используются полимеразная цепная реакция и гибридизация. Эти методы, особенно ПЦР, позволяют выявлять очень малые количества специфической вирусной ДНК или РНК и, таким образом, судить о репликации, а в ряде случаев и об активности репликации.

Будем рады вашим вопросам и отзывам:

Материалы для размещения и пожелания просим присылать на адрес otzivi_i_zamechania@meduniver.com

Присылая материал для размещения вы соглашаетесь с тем, что все права на него принадлежат вам

При цитировании любой информации обратная ссылка на MedUniver.com — обязательна

Для получения координат авторов статей просьба обращаться к администрации сайта

Вся предоставленная информация подлежит обязательной консультации лечащим врачом

Администрация сохраняет за собой право удалять любую предоставленную пользователем информацию

Источник: http://meduniver.com/Medical/zabolevania_pecheni/ifa_v_diagnostike_gepatita.html

ИФА в диагностике вирусных гепатитов

ИФА в диагностике вирусных гепатитов.

Специфическая лабораторная диагностика вирусных гепатитов основывается на применении иммунохимических и молекулярно-биологических методов исследований. Основными иммунохимическими методами являются радиоизотопный или радиоиммунный (РИА) и иммуноферментный (ИФА). В основе иммунохимических методов диагностики лежит специфическое взаимодействие антиген — антитело с последующим выявлением комплекса при помощи специальных меток. Наиболее распространенным является иммуноферментный анализ. Первые сообщения о применении иммуноферментного анализа, как метода для определения каких-либо веществ были опубликованы в 1971 году одновременно двумя исследовательскими группами — В. VanWeemen, A. Schuurs и Е. Engvall, P. Perlmann. В основе иммуноферментного анализа лежит следующий принцип: на твердой фазе, в качестве которой используется, главным образом, поверхность лунок полистиролового планшета, фиксируется антиген возбудителя инфекции или антитела (часто смесь антител) к антигенам, которые необходимо обнаружить. Этот антиген или антитела, которые зафиксированы на твердой фазе, называются иммуносорбентом. В результате инкубации иммуносорбента и испытуемой сыворотки при наличии определяемого агента происходит их связывание в комплекс антиген — антитело. После процедуры промывки, в ходе которой удаляются несвязанные антигены и антитела, проводится инкубация с конъюгатом. В качестве конъюгата при детекции HBsAg используют анти-HBs, при детекции антител к вирусу гепатита С —антитела к иммуноглобулинам человека (антивидовойконъюгат), меченные пероксидазой хрена. В итоге этой инкубации происходит присоединение к уже имеющимся комплексам антиген — антитело дополнительно внесенного конъюгата. После удаления несвязавшегосяконъюгата (отмывки) в лунки вносится субстрат. При использовании пероксидазногоконъюгата в качестве субстрата используют перекись водорода в сочетании с индикатором, в качестве которого наиболее часто применяют ортофенилендиамин (ОФД) или тетраметилбензидин (ТМБ). Результат оценивается фотометрически. Качество и надежность аналитических возможностей иммуноферментного метода характеризуются рядом критериев, к числу которых относятся чувствительность, специфичность, правильность и воспроизводимость.

Для выявления вирусных гепатитов в организме медицина широко применяет метод иммуноферментного анализа, основанного на выявлении концентрации и вида антигенов с помощью антител и ферментов. Проводится поэтапно, путем лабораторных исследований, с высокой точностью показаний. В зависимости от количества и класса антител изменяется цвет и концентрация фермента, который использует ИФА и, согласно этому, врач диагностирует заболевание.

Наличие вирусного гепатита в организме больного определяют с помощью серологического метода анализа крови на присутствие вируса ВГВ, ВГС и маркеров, на него указывающих. Иммуноферментный анализ (ИФА) исследует разные вирусы, низкомолекулярные соединения, макромолекулы, их качественный и количественный показатели, используя проявление реакции на их антигены. Для этого применяют фермент, как метку для сигнальной регистрации. Его все шире используют в медицине, поскольку ИФА четко находит строго определенные антигены, не путая их с другими, имеет высокую чувствительность к наличию инвазии при вирусном гепатите.

ЧИТАЙТЕ ТАКЖЕ:  Когда заразен больной вирусным гепатитом

Анализ нужно сдавать натощак.

Минус такой диагностики — невозможность выявить причину болезни, так как метод указывает только на реакцию иммунной системы организма. На результаты анализа влияет вакцинация, проведенная ранее. За 8 часов перед проведением анализа рекомендуется воздержаться от приема пищи, никотина, алкоголя. Основа ИФА теста — ферментативная и иммунная реакция организма на вирус. Биологические молекулы связываются с клеткой и ее элементами, микроорганизмами, обнаруживают вирус, далее работают ферменты, которые позволяют выразить иммунную реакцию в видимый и измеримый параметр.

Вирусные гепатиты в организме могут стать причиной возникновения онкологических заболеваний и цирроза печени. Важность своевременной диагностики неоспорима. Первичным способом диагностики является тест ИФА, который с высокой точностью определяет наличие HCV вируса (IgM и IgG) и активность его микроэлементов. В обязательном порядке анализы на вирусный гепатит сдают:

Люди с групп риска (наркозависимые, болеющие СПИДом, работники медицинских и правоохранительных учреждений).

Люди с острой или хронической формой гепатита.

Беременные и планирующие беременность женщины.

ИФА распознает болезнь на любой стадии. Результаты анализа, в среднем, готовы за 2 дня.

Иммуноферментный анализ крови поможет определить стадию болезни.

ИФА тест определяет наличие антител класса IgG, IgM, IgA. При диагностике вирусного гепатита врач не обращает внимания на их тип, так как присутствие любого такого проявления вируса HCV уже указывает на острую или хроническую стадию протекания болезни. На ранних стадиях заболевания повышается уровень IgM (через 5 дней после заражения); на 15—20 день появляются IgG антитела и могут долгое время находиться в крови человека даже после излечения; IgA — появляется через 10—14 дней, снижается после лечения.

В случае, если IgG и IgA обнаруживаются после применения препаратов и их уровень остается в том же показателе — у носителя хроническая форма гепатита. Важным критерием теста будет четкое определение класса имеющихся антител и их количества. На основании этого можно знать не просто о наличие заболевания, но и стадию его развития. Обнаружение таких элементов в крови больного дает возможность назначить правильное и своевременное лечение для предотвращения более тяжелых последствий.

В лабораторий ОЦ СПИД проводится исследование на Вирусные гепатиты на полуавтоматическом ИФА. Используют в работе высоко чувствительные и специфичные тест системы Российского производителя. Ежегодно участвует во Внешней Оценке Качества (ВОК) с правильным решением поставленных задач. За 2016 год сделано от 15080 лиц, 46013 анализов на разные виды вирусного гепатита. В том числе на ВГВ маркеры HBsAg – сделано 20275анализов от 15083лиц с 612(+)положительным результатом;

на ВГС сделано 20072анализов от 14887лиц с 934 (+) результатом;

И в дальнейшем социально значимые заболевание ВГС подтверждается следующими видами диагностики: ИФА на маркеры гепатитов и ПЦР РНК ВГС(качество), при ВГВ ПЦР на HBV ДНК (качественный тест, при положительном результате –количественный тест).

Зав. лаб. ОЦ МОЦ СПИД

Обзоры сервисов Pandia.ru

Проекты по теме:

Домашний очаг

Справочная информация

Общество

Образование и наука

Бизнес и финансы

Досуг

Технологии

Инфраструктура

Товары

Мнение редакции может не совпадать с мнениями авторов.

Источник: http://pandia.ru/text/80/380/52754.php

Метод ИФА в обнаружении гепатитов

Современной медицине известно множество заболеваний печени. В число наиболее распространенных и опасных входит ВГС (вирусный гепатит С), поскольку эта инфекция часто развивается бессимптомно и приводит к критическим осложнениям, вплоть до летального исхода. Именно поэтому первостепенное значение имеет своевременная диагностика заболевания, осуществляемая при помощи различных методов, в том числе иммуноферментного анализа (ИФА) для выявления в крови антител к вирусу.

Констатация HCV-инфекции для диагностики гепатита

В лабораторной диагностике для выявления гепатита С (HCV-инфекции) используют два типа методов:

  1. Серологический, основанный на выявлении антител к вирусу гепатита С (анти-HCV), также называется ИФА (иммуноферментный анализ). Он направлен на обнаружение анти-HCV (маркеров IgM и IgG) применяется и для скрининга, и для диагностики гепатита С. Оба этих маркера могут обнаруживаться в крови (плазме) в разных сочетаниях, что требует правильной клинической интерпретации. Для подтверждения наличия анти-HCV проводится тест RIBA (рекомбинантный иммуноблот).
  2. Молекулярно-биологический, направленный на обнаружение РНК вируса. Тест на РНК HCV-инфекции назначают следующим категориям пациентов:
    • с выявленными анти-HCV;
    • без обнаруженных анти-HCV, но с установленными эпидемиологическими и клиническими данными, требующими исключение острой формы ВГС.
ЧИТАЙТЕ ТАКЖЕ:  Вирусные гепатиты а и е

РНК вируса можно выявить в крови уже через 14 дней после инфицирования, то есть до появления анти-НСV, возникающих в течение первых 2-3 месяцев.

Для окончательного подтверждения диагноза (особенно при выявлении лишь одного из двух маркеров HCV-инфекции) специалисты рекомендуют провести через определенное время повторные тесты анти-HCV и РНК HCV.

Выявление гепатита методом ИФА

Для осуществления ранней диагностики вирусных гепатитов, особенно бессимптомных, безжелтушных форм, в сыворотке крови выявляют наличие вирусных белков (антигенов) или антител к ним (вырабатываются иммунной системой при проникновении в организм вирусов) посредством иммуноферментного анализа (ИФА). Это универсальный метод иммунологической диагностики, его суть заключается в исследовании взаимодействия «антиген-антитело». Широко применяется во многих странах мира.

Определение гепатита методом ИФА позволяет не только установить точный диагноз, но и оценить характер заболевания, а также выбрать грамотное и эффективное лечение посредством традиционных лекарственных средств (интерферон, рибавирин), препаратов прямого действия (Софосбувир, Даклатасвир) и их дженериков индийского и китайского производства.

По возможности диагностика вирусного гепатита методом ИФА дополняется ПЦР (полимеразной цепной реакцией), позволяющей определить присутствие в крови РНК вирусов гепатитов.

Насколько точен метод иммуноферментного анализа

По оценкам специалистов, точность метода ИФА составляет 95%, то есть у 95 из 100 пациентов при помощи иммуноферментного анализа можно выявить в крови наличие и количество антител ВГС – IgM и IgG. Если результат положительный, можно диагностировать контакт HCV с организмом (не сам вирус, а именно присутствие в крови антител к нему, что может быть результатом уже перенесенного заболевания).

Однако несмотря на высокую чувствительность метода иммуноферментного анализа (ИФА), у 40% пациентов с положительным результатом вирус может быть не обнаружен, что говорит о сомнительном или ложноположительном результате.

Чтобы подтвердить корректность результатов ИФА, для более точного исследования обнаружения антител к ВГС применяется метод RIBA (рекомбинантного иммуноблоттинга).

Анти НCV core тест

В число эффективных исследований для определения наличия антител к вирусам гепатитов входит анти HCV core, используемый как подтверждающий тест при получении «неопределенных» результатов.

Если в сыворотке крови анти НCV core обнаруживается в разведении 1:1000, с большой вероятностью можно диагностировать положительный результат, то есть заболевание присутствует.

Если же образцы при разведении 1:1000 отрицательные, в разведении 1:200 позитивные, необходимо исследование на наличие вирусной РНК. В этом случае, скорее всего, HCV-инфекции нет.

Важно понимать, что при хронических формах ВГС антитела выявляются постоянно, а при элиминации (выведении из клеток организма) вируса сохраняются на протяжении 4-8 и более лет. Потому наличие анти-HCV не всегда свидетельствует об инфицировании организма и не позволяет делать объективные выводы об активности процесса.Для получения точных данных о вирусной нагрузке, степени поражения печени, длительности инфицирования и различия острой и хронической форм заболевания рекомендуется использовать определение спектра антител к разным HCV пептидам. Также важно пронаблюдать их количественную и качественную динамику.

  • 8 (800) 500-28-78
  • 8 (495) 228-30-03

INDIA-EXPRES — медикаменты из Индии © 2018

Спасибо за Ваш заказ!

Мы свяжемся с Вами в самое ближайшее время.

Спасибо за Ваш заказ!

Мы свяжемся с Вами в самое ближайшее время.

Источник: http://india-expres.com/stati/metod-ifa-v-obnaruzhenii-gepatitov

Ссылка на основную публикацию